استفاده از روش fast pcr جهت تشخیص گونه های فاسیولا

سابقه و هدف: انگل های شایع کبدی فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا از عوامل ایجادکننده فاسیولایازیس بوده، که بیماری جهانی و شایع در انسان و دام می باشد. در مطالعه حاضر ما یک روش سریع، آسان و در عین حال دقیق را با استفاده از متد pcr fast جهت تشخیص افتراقی گونه های فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا معرفی نمودیم. مواد و روش ها: 30 ایزوله فاسیولا ی بالغ از کبد گاو و گوسفند از کشتارگاه های استان مازندران جدا گردید. ناحیه ژنی its1 با استفاده از پره میکس های amp® fast pcr، در مقایسه با یکی از پره میکس های متداول موجود در بازار (accupower® taq pcr premix شرکت bioneer) تکثیر شدند. به علاوه پروفایل pcr-rflp جهت تشخیص افتراقی گونه های فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا با استفاده از آنزیم اندونوکلئازی tasi (tsp509i) انجام گرفت. یافته ها: باندی با وزن تقریبی 463 جفت باز برای تمامی نمونه های فاسیولا با استفاده از پره میکس sapphire amp® fast pcr فقط ظرف مدت 34 دقیقه پس از تکثیر به دست آمد در حالی که تکثیر اسیدهای نوکلئیک با استفاده از پره میکس متداول پس از حدود 1 ساعت و 46 دقیقه کامل شد. تمامی محصولات با آنزیم محدودالاثر (tsp509i tasi) مورد هضم قرار گرفت. پس از هضم در فاسیولا هپاتیکا دو باند 151 و 312 جفت باز و در فاسیولا ژیگانتیکا سه باند 93، 151 و 219 جفت باز تولید شد. استنتاج: واکنش fast pcr با استفاده از پره میکس sapphire amp® در کم تر از 3/1 زمان استفاده از سایر پره میکس های رایج کامل می شود. روش جدید fast pcr با استفاده از پره میکس. sapphire amp® fast pcr یک متد آسان، سریع و در عین حال دقیق بوده که جهت تعیین و تشخیص افتراقی گونه های فاسیولادر مطالعات اپیدمیولوژیک در انسان و دام های اهلی در مناطق اندمیک فاسیولیازیس کاربرد دارد.